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Intro ......

 

liver, nerve, 미세 구조를 잘 살리기 위해서. 검경을 하는 방은 따로 분리되어 있다.1M phosphate buffer * 1차 고정액의 불충분한 제거는 2차 고정액의 침투를 방해함. 조직 접수 보통 Kidney 검체가 많다. 또 회절상에 의한 결정구조의 분석에서도 가능하다. 검경을 하는 방은 따로 분리되어 있다.. ⇒ overnight 과정이 2번 있으므로 결과를 내는데 적어도 3일이 걸린다. 고정 - 자가융해에 의한 변화를 최소화하기 위해 신속한 고정이 필요. 분해능이 수 nanometer(㎚)이고 전자를 광원으로 사용함에 따라 이를 위해서는 초박절편을 만들어야 하며, liver, 투과에 의해 형광판에 상을 맺음으로서 관찰 할 수 있다... . → 사구체를 볼 수 있게 조직을 자른다. ⇒ overnight 과정이 2번 있으므로 결과를 내는데 적어도 3일이 걸린다.2M buffer을 섞어 만든다. 동결레프리타법은 막구조의 분석에 적합하다. 1. ① 1차 고정 : 2. → 0. 초고압전자현미경에서 1μm 가량의 두꺼운 절편의 입체쌍사진을 촬영하는 것으로서 시료를 입체적으로  ......

 

 

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자연과학 다운로드 전자 현미경 보고서 Report

 

[자연과학] 전자 현미경 보고서.hwp 자료 (열기).zip

 

 

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[자연과학] 전자 현미경 보고서

 

` 전체적인 과정 ` TEM용과 SEM용을 구별하여 준비

조직 접수 → 고정 → overnight 냉장→ TEM용 시료(99%이상)/SEM용 시료(1년에 20case 이내) 제조 → 퇴근 전 포매처리, overnight (80℃에서 블록을 형성) → 다음날 trimming 해서 semithin section → ultrathin section → 전자염색 → 전자현미경 촬영 → sacn → 컴퓨터로 확인

⇒ 고정 ~ 포매 전 까지를 전처리 과정으로 본다. TEM용/SEM용을 구분해서 과정을 진행한다. 검경을 하는 방은 따로 분리되어 있다.

⇒ overnight 과정이 2번 있으므로 결과를 내는데 적어도 3일이 걸린다.

 

조직 접수

보통 Kidney 검체가 많다. kidney needle biopsy의 경우 사구체를 중심으로 본다. 그 외에 non-kidney검체로 brain tumor, muscle, nerve, liver, soft tissue 등이 있다.

 

→ ...[ 전체적인 과정 ] TEM용과 SEM용을 구별하여 준비

조직 접수 → 고정 → overnight 냉장→ TEM용 시료(99%이상)/SEM용 시료(1년에 20case 이내) 제조 → 퇴근 전 포매처리, overnight (80℃에서 블록을 형성) → 다음날 trimming 해서 semithin section → ultrathin section → 전자염색 → 전자현미경 촬영 → sacn → 컴퓨터로 확인

⇒ 고정 ~ 포매 전 까지를 전처리 과정으로 본다. TEM용/SEM용을 구분해서 과정을 진행한다. 검경을 하는 방은 따로 분리되어 있다.

⇒ overnight 과정이 2번 있으므로 결과를 내는데 적어도 3일이 걸린다.

 

?? 조직 접수

보통 Kidney 검체가 많다. kidney needle biopsy의 경우 사구체를 중심으로 본다. 그 외에 non-kidney검체로 brain tumor, muscle, nerve, liver, soft tissue 등이 있다.

 

→ 원하는 부분을 잘 보기 위해, 주변의 필요없는 부분을 제거해 준다.

 

→ 사구체를 볼 수 있게 조직을 자른다.

 

? 투과전자현미경 (TEM : transmission electron microscopy)

- 목적 : 조직의 단면의 변화를 보기 위한 현미경

- 원리 : 전자선이 고진공 (10-5 Torr 이하) 상태에서 초박절편 (60~100㎚)에 조사되면 전자선의 흡수, 산란, 투과에 의해 형광판에 상을 맺음으로서 관찰 할 수 있다. 분해능이 수 nanometer(㎚)이고 전자를 광원으로 사용함에 따라 이를 위해서는 초박절편을 만들어야 하며, 따라서 단단한 물질로 조직을 포매 할 필요가 있고 높은 진공과 전자빔에 견딜 수 있는 재질을 요구한다.

평광한 전자선을 사용하여 시료를 투과시킨 전자선을 전자렌즈로 확대하여 관찰하는 전자현미경. 직접배율의 범위가 통상은 100배에서 100만배가량의 상을 형광판 상에 투영하여 관찰해 초미입자의 전자현미경용 필름에 기록한다. 전자선이 시료를 투과할 때에 생기는 산란대조와 위상대조에 따라 상의 대조를 얻어낼 수 있다. 초박절편법에서는 시료의 단편상(두께가 있는 3차원의 절편을 평면상)에 투영한 상을 관찰한다. 동결레프리타법은 막구조의 분석에 적합하다. 바이러스 등의 외형이나 미세한 표면구조를 조사하는 방법으로서 음성염색법이 있다. 저각도 투영법을 사용하면 정제한 핵산이나 단백질 등의 분포는 면역전자현미경법으로 분석한다. 또 회절상에 의한 결정구조의 분석에서도 가능하다. 초고압전자현미경에서 1μm 가량의 두꺼운 절편의 입체쌍사진을 촬영하는 것으로서 시료를 입체적으로 사용할 수 있다.

 

1. 고정

 

 

- 자가융해에 의한 변화를 최소화하기 위해 신속한 고정이 필요.

① 1차 고정 : 2.5% glutaraldehyde in 0.1M phosphate buffer

* 고정성은 좋으나 침투력이 낮아 조직을 세절 (1mm3 ) 해야함.

* 방향성이 있는 조직 (muscle, nerve)과 여러 층으로 된 조직(피부, 혈관,

심근, 소화기계 점막, 호흡기 점막 등)은 1×2×2mm 정도로 한쪽 방향을

길게 하여야 포매 하기가 용이하다.

* 조직의 변화를 최소화하기 위해 냉장온도에서 1시간~ 하룻밤 정도 고정

한다. → 괴사를 막고, 미세 구조를 잘 살리기 위해서.

② 고정액의 제거; 1차 고정액에 사용한 것과 같은 buffer에 10분씩×2회 수세.

→ 0.1M phosphate buffer

* 1차 고정액의 불충분한 제거는 2차 고정액의 침투를 방해함.

③ 2차 고정 : 1% OsO4 (Osmium tetroxide)

→ 2% OsO4에 0.2M buffer을 섞어 만든다.

 

 

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